【革兰氏染色的步骤和原理】革兰氏染色是微生物学中最常用的染色方法之一，主要用于区分细菌的细胞壁结构。该方法由丹麦科学家汉斯·克里斯蒂安·格兰（Hans Christian Gram）于1884年发明，能够将细菌分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）。其基本原理基于细菌细胞壁对染料的吸附能力及脱色过程中的差异。
一、革兰氏染色的原理
革兰氏染色的核心原理是通过一系列染色与脱色步骤，根据细菌细胞壁的组成差异来实现颜色的区分：
- 革兰氏阳性菌：细胞壁较厚，主要由肽聚糖构成，且含有较多的磷壁酸。它们能保留结晶紫染料，在酒精脱色后仍保持紫色。
- 革兰氏阴性菌：细胞壁较薄，肽聚糖层较少，但外膜中含有脂多糖和脂蛋白。它们在酒精脱色过程中容易失去结晶紫，最终被复染剂（如沙黄或番红）染成红色。
二、革兰氏染色的步骤
以下是革兰氏染色的标准操作流程：
| 步骤 | 操作内容 | 目的 |
| 1 | 涂片并固定 | 将菌液均匀涂布在载玻片上，并通过火焰固定，使细菌附着于载玻片 |
| 2 | 初染（结晶紫） | 用结晶紫染色1分钟，使所有细菌呈紫色 |
| 3 | 媒染（碘液） | 加入碘液1分钟，形成结晶紫-碘复合物，增强染色效果 |
| 4 | 脱色（乙醇/丙酮） | 用95%乙醇或丙酮脱色30秒至1分钟，去除未结合的染料 |
| 5 | 复染（沙黄或番红） | 用沙黄或番红复染1分钟，使脱色后的细菌呈红色 |
三、结果判断
- 革兰氏阳性菌：呈现蓝紫色
- 革兰氏阴性菌：呈现红色
四、注意事项
- 染色时间需严格控制，过长或过短都会影响结果准确性。
- 脱色时间是关键步骤，过度脱色会导致假阴性结果。
- 涂片不宜过厚，否则会影响染色效果和观察。
通过上述步骤和原理，革兰氏染色不仅有助于细菌的初步分类，也为后续的病原鉴定和药物敏感性测试提供了重要依据。
